南京信帆生物：蛋白質(zhì)濃縮、干燥及貯存
更新時(shí)間：2016-04-27 點(diǎn)擊次數(shù)：1227次
一、樣品的濃縮
生物大分子在制備過程中由于過柱純化而樣品變得很稀，為了保存和鑒定的目的，往往需要進(jìn)行濃縮。常用的濃縮方法的：
- 減壓加溫蒸發(fā)濃縮
通過降低液面壓力使液體沸點(diǎn)降低，減壓的真空度愈高，液體沸點(diǎn)降得愈低，蒸發(fā)愈快，此法適用于一些不耐熱的生物大分子的濃縮。 空氣流動(dòng)蒸發(fā)濃縮 空氣的流動(dòng)可使液體加速蒸發(fā),鋪成薄層的溶液，表面不斷通過空氣流；或?qū)⑸锎蠓肿尤芤貉b入透析袋內(nèi)置于冷室，用電扇對(duì)準(zhǔn)吹風(fēng)，使透過膜外的溶劑不沁蒸發(fā)，而達(dá)到濃縮目的，此法濃縮速度慢，不適于大量溶液的濃縮。 冰凍法 生物大分子在低溫結(jié)成冰，鹽類及生物大分子不進(jìn)入冰內(nèi)而留在液相中，操作時(shí)先將待濃縮的溶液冷卻使之變成固體，然后緩慢地融解，利用溶劑與溶質(zhì)融點(diǎn)介點(diǎn)的差別而達(dá)到除去大部分溶劑的目的。如蛋白質(zhì)和酶的鹽溶液用此法濃縮時(shí)，不含蛋白質(zhì)和酶的結(jié)晶浮于液面，蛋白質(zhì)和酶則集中于下層溶液中，移去上層冰塊，可得蛋白質(zhì)和酶的濃縮液。 吸收法 通過吸收劑直接收除去溶液中溶液分子使之濃縮。所用的吸收劑必需與溶液不起化學(xué)反應(yīng)，對(duì)生物大分子不吸附，易與溶液分開。常用的吸收劑有聚乙二醇，聚乙稀吡咯酮、蔗糖和凝膠等，使用聚乙二醇吸收劑時(shí)，先將生物大分子溶液裝入半透膜的袋里，外加聚乙二醇復(fù)蓋置于4度下，袋內(nèi)溶劑滲出即被聚乙二醇迅速吸去，聚乙二醇被水飽和后要更換新的直至達(dá)到所需要的體積。 超濾法 超濾法是使用一種特別的薄膜對(duì)溶液中各種溶質(zhì)分子進(jìn)行選擇性過濾的方法，不液體在一定壓力下（氮?dú)鈮夯蛘婵毡脡海┩ㄟ^膜時(shí)，溶劑和小分子透過，大分子受阻保留，這是近年來發(fā)展起來的新方法，zui適于生物大分子尤其是蛋白質(zhì)和酶的濃縮或脫鹽，并具有成本低，操作方便，條件溫和，能較好地保持生物大分子的活性，回收率高等優(yōu)點(diǎn)。應(yīng)用超濾法關(guān)鍵在于膜的選擇，不同類型和規(guī)格的膜，水的流速，分子量截止值（即大體上能被膜保留分子zui小分子量值）等參數(shù)均不同，必須根據(jù)工作需要來選用。另外，超濾裝置形式，溶質(zhì)成份及性質(zhì)、溶液濃度等都對(duì)超濾效果的一定影響。Diaflo 超濾膜的分子量截留值
膜名稱
分子量截留值
孔的大的平均直徑
XM －300
300，000
140
XM－200
100，000
55
XM－50
50，000
30
PM－30
30，000
22
UM－20
20，000
18
PM－10
10，000
15
UM－2
1，000
12
UM05
500
10
用上面的超濾膜制成空心的纖維管，將很多根這樣的管攏成一束，管的兩端與低離子強(qiáng)度的緩沖液相連，使緩沖液不斷地在管中流動(dòng)。然后將纖維管浸入待透析的蛋白質(zhì)溶液中。當(dāng)緩沖液流過纖維管時(shí)，則小分子很易透過膜而擴(kuò)散，大分子則不能。這就是纖維過濾秀析法，由于透析面積增大，因而使透析時(shí)間縮短10倍。
二、干燥
生物大分子制備得到產(chǎn)品，為防止變質(zhì)，易于保存，常需要干燥處理，zui常用的方法是冷凍干燥和真空干燥。真空干燥適用于不耐高溫，易于氧化物質(zhì)的干燥和保存，整個(gè)裝置包括干燥器、冷凝器及真空干燥原理外，同時(shí)增加了溫度因素。在相同壓力下，水蒸汽壓隨溫度下降而下降，故在低溫低壓下，冰很易升華為氣體。操作時(shí)一般先將待干燥的液體冷凍到冰點(diǎn)以下使之變成固體，然后在低溫低壓下將溶劑變成氣體而除去。此法干后的產(chǎn)品具有疏松、溶解度好、保持天然結(jié)構(gòu)等優(yōu)點(diǎn)，適用于各類生物大分子的干燥保存。
三、貯存
生物大分子的穩(wěn)定性與保存方法的很大關(guān)系。干燥的制品一般比較穩(wěn)定，在低溫情況下其活性可在數(shù)日甚至數(shù)年無明顯變化，貯藏要求簡(jiǎn)單，只要將干燥的樣品置于干燥器內(nèi)（內(nèi)裝有干燥劑）密封，保持0－4度冰箱即可，液態(tài)貯藏時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn)。
- 樣品不能太稀，必須濃縮到一定濃度才能封裝貯藏，樣品太稀易使生物大分子變性。 一般需加入防腐劑和穩(wěn)定劑，常用的防腐劑有甲苯、苯甲酸、氯仿、百里酚等。蛋白質(zhì)和酶常用的穩(wěn)定劑有硫酸銨糊、蔗糖、甘油等，如酶也可加入底物和輔酶以提高其穩(wěn)定性。此外，鈣、鋅、硼酸等溶液對(duì)某些酶也有一定保護(hù)作用。核酸大分子一般保存在氯化鈉或檸檬酸鈉的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液中。 貯藏溫度要求低，大多數(shù)在0度左右冰箱保存，有的則要求更低，應(yīng)視不同物質(zhì)而定。elisa試劑盒，進(jìn)口elisa試劑盒，放射免疫試劑盒，amresco，Gibco培養(yǎng)基-南京信帆生物技術(shù)有限公司
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